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產品簡介
紅細胞裂解液（Re* Bloo* Cell Lysis Buffer，或稱ACK Lysis Buffer），是一種經典的用于從人或鼠等的血液或組織樣品中去除無核紅細胞的裂解液，幾乎不損傷淋巴細胞（lymphocyte）或其它有核細胞。本產品是利用細胞內滲透壓濃度差而導致細胞膜脹破的原理裂解紅細胞。主要成分包含氯化銨、碳酸氫鉀、Na2E*TA。因銨根離子無法通過細胞膜，而其他離子可以通過，造成細胞內外的離子濃度差異，外部水分擴散至細胞內，使紅細胞膨脹，達到裂解效果。
經紅細胞裂解液裂解得到的組織細胞中不含紅細胞，可進一步用于淋巴細胞的分離純化、原代培養(yǎng)、細胞融合、流式細胞分析、核酸與蛋白的提取等。本裂解液適用于人，大小鼠等哺乳動物新鮮血液，不適用于有核紅細胞的裂解，例如鳥或禽類的紅細胞。本產品經過無菌處理。
保存條件
常溫配送。4 &or*m;C保存，1年有效。
注意事項
1．本產品為無菌試劑，使用時請注意無菌操作，避免細菌污染。
2．通常情況下，血液樣品與紅細胞裂解液按1:3比例裂解，對一些特殊病例如白血病、紅細胞增多癥等，建議采用1:4或更高比例以保證結果。
3．在離心洗滌后，如發(fā)現極微量的紅細胞，可繼續(xù)試驗，不會影響后續(xù)檢測。
4．本產品僅用于科學研究，不得用于臨床診 斷和治 療，不得用于食品和yao 品，不得存放于普通住宅內。
5．為了您的安Quan和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明
對于組織細胞樣本：
1．新鮮組織經過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。
2．加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細胞沉淀的體積為1 mL，則加入3-5 mL的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4℃操作均可。
3．維修-500 g離心5 min，棄紅色上清。4&or*m;C離心效果更佳。
4．如果發(fā)現紅細胞裂解不完Quan，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，維修-500 g離心2-3 min，棄上清。可再重復1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4&or*m;C離心效果更佳。
6．根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數等后續(xù)實驗。
對于組織細胞樣本無需洗滌的快速操作：
1．新鮮組織經過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。
2．對于0.2 mL細胞沉淀加入1 mL紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。本步驟在室溫或4&or*m;C操作均可。
3．加入15-20 mL PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。
4．維修-500 g離心5 min，棄紅色上清。4&or*m;C離心效果更佳。
5．如果發(fā)現紅細胞裂解不完Quan，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
6．根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數等后續(xù)實驗。
說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
對于血液樣本：
1．取新鮮抗凝血，維修-500 g離心5 min，棄上清。
2．加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細胞沉淀的體積為1 mL，則加入6-10 mL的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解1-2 min已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4-5 min，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。
3．維修-500 g離心5 min，棄紅色上清。 4&or*m;C離心效果更佳。
4．如果發(fā)現紅細胞裂解不完Quan，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，維修-500 g離心2-3 min，棄上清。可再重復1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4&or*m;C離心效果更佳。
6．根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數等后續(xù)實驗。
注意：對于微量或少量的血液樣品，可以在步中不進行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細胞裂解液，并在室溫或4&or*m;C裂解4-5 min。對于鼠的血液，裂解4-5 min已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15 min，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。后續(xù)步驟相同。
對于血液樣本無需洗滌的快速操作：
1．每1 mL新鮮抗凝血中加入10 mL紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5 min。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解4-5 min已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15 min，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。
2．加入20-30 mL PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。
3．維修-500 g離心5 min，棄紅色上清。4&or*m;C離心效果更佳。
4．如果發(fā)現紅細胞裂解不完Quan，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5．根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數等后續(xù)實驗。
說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。